土壤样品:
对于将要用来提取RNA或DNA的土壤样品因为在采集和运输过程中,RNA表达随着环境的变化发生突然改变。而加入专业配方RNA保护液LifeGuard™Soil Preservation Solution,可在保护微生物存活的情况下使它们处于停滞状态。RNase和DNase活性被抑制后可确保无论在什么样的野外条件下采集样品,都能获得准确的全长cDNA合成和16s rRNA序列分析结果。加入LifeGuard™ 土样中的微生物多样性可在-20℃下维持30天,4℃ 2星期,室温 一星期。RNA完整性在室温下可维持30天。
LifeGuard™ 已通过了大量不同微生物丰度和含水量的样品的测试。沉积物含水量较高会稀释保护液,需要使用更高的体积比(3:1)。
土壤在不同温度条件下保存的稳定性和LifeGuard™ 维持微生物多样性的能力,决定于样品中的微生物丰度。微生物丰度未明或保存环境温度超过常温(22-25℃)的,建议尽快转移到-20℃或4℃,及每克样品使用多于2.5ml的LifeGuard™ 保护液,以确保维持住微生物群落多样性不变。要更长时间的保存或运输(>30天),请-20℃保存样品。
水样滤膜:
我们也测试了LifeGuard Soil Preservation Solution对滤膜DNA、RNA的保护。对于浑浊样品,能有效减少核酸降解。加入2-4ml LifeGuard到装有已过滤水样滤膜的研磨管中,浸润滤膜为度。4℃或更低温度长期保存(>一周)。
处理使用LifeGurad保存水样滤膜前,先离心。尽可能吸掉保护液,避免其过分稀释裂解缓冲液。另,为了使保护液尽可能去除,也可以把滤膜与研磨珠分开保存。
额外提示:
我们常被问到采样后土样中RNA的稳定性,以及RNALater的使用。事实上RNALater并不兼容土壤。我们做过用RNALater在不同温度和时间下对土壤RNA的保护试验,结果发现随着保存时间的延长,RNALater会令土样释放出更多的腐植酸,粘附在RNA上与RNA共同吸附于阴离子交换离心柱滤膜上难以去除。保存的时间越长,样品颜色变得越深。